プリオンの高感度検出法（および117 回一部修正）
１．プリオンの高感度検出法 本講座１１０回と１１５回でBSE牛についてのプリオン検出法の開発の 現状をご紹介しました。そこには名前が出てこなかった研究所からユニ ークなプリオン検出法がNature 411, p. 810（６月１４日号）に発表されま した。スイスのジュネーブにある、セロノ医薬研究所（Serono Pharmaceutical Research Institute）のガブリエラ・サボリオ(Gabriela Saborio)たちの論文です。 これまでウシ海綿状脳症（BSE）、クロイツフェルト・ヤコブ病（CJD）な ど、プリオン病の診断は、異常プリオン蛋白質（PrPSc：scrapie-type prion proteinの略）の検出に依存してきています。１１０回で述べたよう に、現在、BSEについては３社のキットが実用化されています。これらは ウエスタン・ブロットやELISAによるPrPSc検出です。どれもが、検出感 度を高める工夫を施されていますが、脳の中でもPrPScが高い濃度で 見つかる部分の組織についての検査であって、微量のPrPSc検出は できません。 これとは別にさらに高感度の方法として、マウスへの脳内接種で発病 を見る、いわゆるマウス・バイオアッセイがあります。これは、通常の ウエスタン・ブロットよりも１０００倍くらい高い検出感度と言われていま す。ただし、潜伏期が１年以上あるために、実用にはなりません。 セロノ研究所の方法は、ちょうど核酸の場合のポリメラーゼ・チェーン 反応（PCR）のように、サンプル中のPrPScを増幅して検出しようという、 新しい方式です。その概略をご紹介します。 PrPSc として用いたのはスクレイピー（ハムスターに順化させた２６３ K株）を感染させたハムスターの脳の乳剤です。これを希釈し、それに 正常プリオン蛋白質（PrPC：cellular prion proteinの略）として正常なハ ムスターの脳乳剤を加えて試験管内で培養します。これによりPrPSc （蛋白質分解酵素抵抗性の）の量の増加が認められます。つまり、過 剰に加えられたPrPCがPrPScに構造変換したことになります。それを 音波処理にかけて、凝集しているPrPScをこまかくして、ふたたびPrP Cと培養します。 このようにして、培養-音波処理のサイクルを繰り返すことでPrPScの 量がだんだん増加していきます。これを彼らはprotein-misfolding cyclic amplification (PMCA)と名付けています。 ５サイクルでPrPScの増加率は平均５８倍でした。１０サイクルでは、 PrPScサンプルを１万倍以上に希釈しても検出でき、これはマウス・バ イオアッセイと同等、もしくはそれ以上の感度であると述べています。 この方法が改良されれば、潜伏期中の動物の診断にも応用できる可 能性があります。 未発表だが、孤発型CJDの患者の脳のサンプルにも、この方法が 応用できたとも述べています。 一方、プリオン説では蛋白質が病原体とされていますが、その決定 的証拠として、試験管内で作り出したPrPScについて感染性を証明す ることが考えられます。これまでのところ、これは成功していませんが、 今回の方法で多量にPrPScを増幅できれば、プリオン説の裏付けに も役立つ可能性があると、著者たちは述べています。 ２．１１７回の一部修正 OIEのInternational Animal Health Codeの和訳「国際動物健康綱 領」を「国際動物衛生規約」に修正してください。Topへ戻る
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